بررسی اثر ضد قارچی عصاره تام متانولی و فراکسیون های اتردوپترولی، کلروفرمی، اتیل استاتی،متانولی و آبی بخش هوائی

بخش دوم :مراحل تهیه عصاره گیاهی

2-2-1.تعریف عصاره .................................................................................................................................................................... 16

2-2-2.عصاره گیری....................................................................................................................................................................... 16

2-2-3.روش های عصاره گیری ............................................................................................................................................... 16

2-2-3-1.روش خیساندن............................................................................................................................................................ 16

2-2-3-2.روش پرکولاسیون...................................................................................................................................................... 17

2-2-3-3.انتخاب حلال مناسب.............................................................................................................................................. 18

2-2-3-4.مزایای پرکولاسیون................................................................................................................................................. 19

2-2-3-5.روش خیساندن با حرارت ملایم .......................................................................................................................... 19

2-2-3-6.روش دم کردن ........................................................................................................................................................... 19

2-2-3-7.روش جوشاندن .......................................................................................................................................................... 20

2-2-4.روش های مختلف تغلیظ عصاره ............................................................................................................................... 20

2-2-4-1.تقطیر در خلا............................................................................................................................................................... 20

2-2-4-2.لیو فیلیزاسیون ........................................................................................................................................................... 20

2-2-4-3.حرارت مستقیم ......................................................................................................................................................... 21

بخش سوم :کلیات قارچ شناسی

2-3-1. خصوصیات قارچ ها........................................................................................................................................................ 23

2-3-2.تولید مثل قارچ ها .......................................................................................................................................................... 24

2-3-2-1.تولید مثل غیر جنسی ............................................................................................................................................ 24

2-3-2-2.تولید مثل جنسی ..................................................................................................................................................... 25

2-3-3.ساختمان پیکری قارچ ها ............................................................................................................................................ 25

2-3-4.شرایط لازم رشد قارچ ها ............................................................................................................................................. 26

2-3-5.قارچ های مورد بررسی در این تحقیق .................................................................................................................... 27

2-3-5-1.جنس میکروسپوریوم(Microsporum.......................................................................................................... 27

2-3-5-1-1.میکروسپوروم کانیس (M. canis) ........................................................................................................... 27

2-3-5-1-2.میکروسپوروم جیپسئوم (M .gypseum................................................................................................. 28

2-3-5-2.جنس ترایکوفایتون ( Trichophytom ) .................................................................................................. 29

2-3-5-2-1.ترایکوفایتون منتاگروفایتیس (T.mentagrophaytes )................................................................ 29

2-3-5-2-2.ترایکوفایتون روبروم(T .rubrum) ............................................................................................................ 30

2-3-5-2-3.ترایکوفایتون وروکوزوم(T. vorrocosum,)........................................................................................... 30

2-3-5-3. جنس اپیدرموفایتون (Epidermophyton) ........................................................................................... 31

2-3-5-3-1.اپیدرموفایتون فلوکوزوم((E.floccosum .............................................................................................. 31

2-3-5-4.جنس آسپرژیلوس( Aspergillus) ........................................................................................................... 31

2-3-5-4-1.آسپرژیلوس فومیگاتوس (Aspergillus fumigates)................................................................... 32

2-3-5-4-2.آسپرژیلوس فلاووس (Aspergillus fumigates) ......................................................................... 32

2-3-5-5.کاندیداالبیکنس (Candida albicans....................................................................................................... 32

بخش چهارم: بیماری هایقارچی

2-4-1.اکتساب عفونتهای قارچ.............................................................................................................................................. 34

2-4-2.انواع بیماریهای قارچی حاصل ازقارچ های مورد نظر...................................................................................... 34

2-4-2-1.بیماری قارچی گوش خارجی ............................................................................................................................... 35

2-4-2-2.بیماری قارچی جلدی............................................................................................................................................... 36

2-4-2-3.آسپرژیلوزیس .............................................................................................................................................................. 41

2-4-2-3-1.آسپرژیلوزیس آلرژیک.......................................................................................................................................... 42

2-4-2-3-2.آسپرژیلوما یا آسپرژیلوزیس کلنیزه............................................................................................................... 42

2-4-2-3.آسپرژیلوزیس مهاجم................................................................................................................................................ 43

2-4-2-4.کاندیدیازیس................................................................................................................................................................ 43

2-4-2-4-1.عفونتهای مخاطی.............................................................................................................................................. 44

2-4-2-4-2.بیماریهای جلدی................................................................................................................................................ 44

2-4-2-4-3.بیماریهای سیستمیک ..................................................................................................................................... 44

بخش پنجم:روش های بررسی عوامل ضد قارچی

2-5.روشهای اندازهگیری عوامل ضدقارچی........................................................................................................................ 47

2-5-1.عوامل مؤثر بر رشد میکروارگانیسمها...................................................................................................................... 47

2-5-1-1.محیط کشت ............................................................................................................................................................... 47

2-5-2-2.عوامل مؤثر در کشت .............................................................................................................................................. 47

2-5-2-3. مقدار قارچ................................................................................................................................................................... 48

2-5-2-4. دما.................................................................................................................................................................................. 48

2-5-2-5 .اکسیژن......................................................................................................................................................................... 48

2-5-3.ارزیابی ترکیبات ضد قارچی......................................................................................................................................... 49

2-5-3-1.روش رقیقسازی.......................................................................................................................................................... 49

2-5-3-1.روش لوله........................................................................................................................................................................ 49

2-5-3-2.روش پلیت با استفاده از محیط جامد................................................................................................................ 49

2-5-3-1-3. روش گرادیانت پلیت.......................................................................................................................................... 50

2-5-3-2.روش کدورت سنجی................................................................................................................................................. 50

2-5-3-3.روش انتشار................................................................................................................................................................... 51

2-5-3-3-1.انتشار عمودی........................................................................................................................................................ 51

2-5-3-3-1.انتشار افقی.............................................................................................................................................................. 51

2-5-4 .عوامل مؤثر در اندازهگیری به روش انتشار ......................................................................................................... 54

2-5-4-1.آگار ................................................................................................................................................................................. 54

2-5-4-2. pHآگار و محلول مورد اندازهگیری.................................................................................................................. 55

2-5-4-3. شرایط کشت در گرمخانه...................................................................................................................................... 56

2-5-4-4. طرز قرار دادن میکروارگانیسمهاروی اگار....................................................................................................... 56

2-5-4-5.ماده مورد اندازهگیری............................................................................................................................................... 57

2-5-4-6.هالههای رشد و عدم رشد ...................................................................................................................................... 57

2-5-5. صحت نتایج حاصل ....................................................................................................................................................... 58

2-5-6. محاسن و معایب روش انتشار ................................................................................................................................... 58

2-5-7.حداقل غلظت مهاری .................................................................................................................................................... 59

2-5-8.روشهای تعیین MIC ................................................................................................................................................. 59

2-5-9.عوامل مؤثر در تعیین MIC...................................................................................................................................... 59

فصل سوم :مواد و روش ها

بخش اول :کارهای مقدماتی

3-1-1.مواد و وسایل آزمایش ................................................................................................................................................. 63

3-1-2.جمعآوری گیاه.................................................................................................................................................................. 64

3-1-3. خشک کردن.................................................................................................................................................................... 64

3-1-4.پودر کردن ........................................................................................................................................................................ 64

3-1-5.پرکولاسیون....................................................................................................................................................................... 64

3-1-6.تغلیظ عصارههای تهیه شده توسط دستگاه........................................................................................................... 65

بخش دوم:کشت قارچ

3-2-1.تهیه غلظتهای مورد نیاز از عصاره گیاه................................................................................................................ 67

3-2-2.تهیه محیط کشت............................................................................................................................................................ 67

3-2-2-1.روش چاهک.................................................................................................................................................................. 67

3-2-2-2.کشت قارچ.................................................................................................................................................................... 68

3-2-2-3.روش اختلاط عصاره و محیط کشت.................................................................................................................... 68

3-2-2-3. روش تهیه سوسپاسیون قارچ و عصاره گیاهی ....................................................................... 68

3-2-4.کنترل + ............................................................................................................................................................................. 68

3-2-5.کنترل – ............................................................................................................................................................................ 68

فصل چهارم:نتایج

1-4.مشاهد پلیت ها بعد از کشت قارچ ها........................................................................................................................... 70

فصل پنجم :بحث و نتیجه گیری

1-5.بحث و نتیجه گیری.............................................................................................................................................................. 73

2-5.پیشنهادها ............................................................................................................................................................................... 74

خلاصه انگلیسی .......................................................................................................................................................................... 75

فهرست منابع................................................................................................................................................................................. 76

ضمائم.................................................................................................................................................................................................. 80

فهرست جداول

عنوان صفحه

جدول3-1 مواد بکار رفته در تحقیق ...................................................................................................................................... 63

جدول3-2دستگاه های مورد استفاده .................................................................................................................................... 63

جدول1-4 بررسی رشد قارچ ها ............................................................................................................................................... 70